A. Radek Martinez
2016-08-19 23:57:36 UTC
我目前正在嘗試查看2種細菌是否包含質粒。我已經對細菌使用了promega質粒提取試劑盒。我對提取物產物進行了凝膠電泳（0.8％凝膠），但未顯示任何DNA的存在。我還通過Nanodrop（2000）運行了產品，得到的濃度如下：
1：6.5 ng / ul & 260/280 = 1.56
2：49.4 ng / ul & 260/280 ：1.96
根據經驗，我想說＃1不包含質粒，但是＃2可能含有少量的質粒。請給我您對結論的看法。另外，如果還有其他測試可以嘗試確認是否存在質粒，請告訴我。
如果您的樣品被蛋白質污染（可能會發生），則得到的OD 260/280會升高，並且會錯誤地顯示某些核酸。如果您在凝膠上運行了幾微升而看不到任何東西，我將很可疑。專心致志足以看到一些東西。
運行凝膠時，DNA的數量至關重要，而不僅僅是濃度。您在凝膠上運行了多少體積的每個樣品？使用上面確定的濃度來查看應有多少DNA。如果假設的數量看起來不錯，並且您在凝膠上看不到任何東西，那我說沒有任何真正的DNA。至於測試質粒的存在，您可以嘗試將可疑樣品重新轉染到其他細菌中，因為您不需要太多拷貝的質粒即可獲得良好的菌落。
可能是這樣。我相信納米滴顯示蛋白質污染。我將嘗試濃縮質粒DNA，並增加凝膠體積。如果找不到質粒，那麼我將假定沒有蛋白質。